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带有HA标签的HBc蛋白真核表达质粒的构建及其在HEK293细胞中的表达

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【作者】 章广玲； 袁丽杰； 王芳； 汤华； 张银； 张淑杰；

【机构】 华北煤炭医学院生物科学系； 天津医科大学天津市生命科学中心实验室；

【摘要】 目的构建带有流感病毒血凝素9钛表位标签(HA标签)的乙型肝炎病毒(HBV)核心蛋白(HBc)的表达质粒,为进一步研究HBc蛋白基因的功能奠定实验基础。方法设计并合成扩增HBc蛋白全长的PCR引物,以野生型的HBV质粒pDolTHBV-1为模板,PCR扩增全长的HBc蛋白,大小为563 bp;PCR产物经过EcoRI和XholI酶切后,与线性化的pcDNA3/HA载体连接后转化大肠杆菌,扩增、纯化获得所需质粒,以琼脂糖凝胶电泳、酶切鉴定以及基因测序鉴定其分子质量和插入片段的序列;构建的质粒转染HEK293细胞48 h后,RIPA裂解细胞,West-ern blot检测HBc蛋白表达。结果纯化质粒的相对分子质量为5.9 kb,酶切鉴定结果符合目的条带(563 bp)大小,插入的寡核苷酸序列与野生型HBV基因序列完全相符,表达的融合蛋白大小为28 kDa。结论成功构建了带有HA标签的HBc蛋白的真核表达质粒pcDNA3/HA-HBc蛋白,为进一步研究HBc蛋白的功能奠定了良好的实验基础。

【关键词】 质粒； 乙肝病毒核心蛋白； 基因； 表达；
【基金】 天津市应用基础及前沿技术研究计划项目(09JCZJC17500)
  • 【文献出处】 山东医药 ,Shandong Medical Journal , 编辑部邮箱 ,2010年07期
  • 【分类号】R392
  • 【被引频次】1
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