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人心脏发育相关基因ZNF382的原核表达及多克隆抗体的制备
【摘要】 目的表达、纯化ZNF382融合蛋白及制备兔多克隆抗体。方法通过PCR扩增ZNF382编码区,将其克隆到pRSETC载体中,重组载体酶切鉴定,测序,转化大肠杆菌BL21(DE3)并用IPTG进行诱导表达,原核表达产物经鉴定、纯化后,免疫新西兰大白兔。通过ELISA和Wester nblot检测抗血清的效价和特异性。结果成功构建了pRSETC-ZNF382原核表达重组质粒,His6-ZNF382融合蛋白被强烈诱导表达,以包涵体的形式存在,其相对分子质量约为64×103,纯化后免疫产生的多克隆抗体效价约为1∶10000,与ZNF382原核表达蛋白特异性结合。结论获得了大量高效价、高特异性的兔抗人ZNF382多克隆抗体。
【基金】 福建省教育厅科技项目(JA06021,JB06153);卫生部科学研究基金—福建省卫生教育联合攻关计划资助项目(WKJ2008-2-55)
- 【文献出处】 第三军医大学学报 ,Acta Academiae Medicinae Militaris Tertiae , 编辑部邮箱 ,2010年11期
- 【分类号】R392-33
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