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pCS2+-FLASH重组质粒的构建及斑马鱼FLASH基因反义mRNA探针的制备
【摘要】 目的构建斑马鱼pCS2+-FLASH重组质粒,制备斑马鱼FLASH反义mRNA探针。方法提取斑马鱼胚胎总RNA后经RT-PCR克隆斑马鱼FLASH基因片段,将得到的FLASH片段和pCS2+质粒用BamHⅠ及HindⅢ双酶切后插入pCS2+质粒,通过对重组质粒进行双酶切及插入片段序列测序鉴定后,经T3RNA体外转录体系合成DIG-FLASH基因反义mRNA探针。结果RT-PCR法扩增出长度为533bp的特异性产物,构建的pCS2+-FLASH重组质粒经酶切鉴定和测序结果与预期相符;用FLASH反义mRNA探针进行斑马鱼全胚胎原位杂交,观察到FLASH在野生型斑马鱼神经系统中存在表达。结论成功构建了pCS2+-FLASH重组质粒及FLASH基因反义mRNA探针。
【基金】 国家自然科学基金面上项目(30960412);贵州省科技基础条件平台项目([2009]4005);贵州省优秀科技教育人才省长专项资金(S2008-4)
- 【文献出处】 第三军医大学学报 ,Acta Academiae Medicinae Militaris Tertiae , 编辑部邮箱 ,2010年10期
- 【分类号】Q78
- 【被引频次】2
- 【下载频次】180