目的探讨指甲游离缘及毛发中抽提核DNA的方法,并对抽提结果进行评估。方法采集5名健康成人志愿者指甲游离缘、发根及发干样本各30份。分别用无水乙醇和蒸馏水浸泡样本,去除外源性DNA。每份指甲游离缘样本为3mg指甲游离缘碎片;每份发根或发干样本各为3段0.3～0.5cm发根或发干。分别采用酚氯仿法、Chelex-100法和QIAamp DNA Investigator试剂盒法抽提3种样本的核DNA,并运用PCR扩增对抽提DNA进行评估。扩增片段位于不同染色体上,长度分别为188、248、300和741bp。PCR扩增产物用1.8%琼脂糖凝胶电泳检测。为探讨样本量对抽提结果的影响,任意取指甲游离缘1、3和5mg,发根及发干各1、3和5根重复实验,并比较结果。初步探讨增加Taq酶量对黑色素抑制的消除作用。结果在3种抽提方法中长度为248bp的引物扩增成功率均为最高。指甲游离缘样本使用试剂盒法抽提核DNAPCR扩增成功率显著高于酚氯仿法及Chelex-100法(P<0.05)。发干样本使用试剂盒法抽提核DNAPCR扩增成功率显著高于酚氯仿法(P<0.05)。发根样本3种方法抽提核DNAPCR扩增成功率差异无统计学意义(...
【英文摘要】
Objective To evaluate three different assays,including the phenol-chloroform method,the Chelex-100 method,and the QIAamp DNA Investigator Kit method(kit method) for extracting nuclear DNA(nDNA) from free margins of finger nail and hair samples.Methods 30 samples of free nail clipping margins,hair roots and hair stems were obtained from 5 healthy Chinese volunteers.All samples were washed by 100% ethanol and sterile water to remove extraneous DNA from the surface.For nail samples,3 mg clippings were content...
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