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ePNP自杀基因载体的构建及其表达
Vector Construction and Expression of E.Coli PNP Suicide Gene
【摘要】 [目的]构建稳定表达ePNP(E.coliPNP)的细胞模型,为肿瘤的基因治疗提供实验基础。[方法]提取大肠杆菌E.coliK12总DNA,PCR方法克隆大肠杆菌ePNP基因,构建逆转录病毒载体质粒pMSCV-ANGPTL4,鉴定测序。脂质体法将三种逆转录病毒载体pMSCV-ANGPTL4、pVSV、pGAG-POL共转染293-EBNA包装细胞,获得高滴度病毒并感染MDA-MB435细胞。荧光显微镜与RT-PCR检测MDA-MB435细胞ePNP基因的表达。[结果]所克隆的ePNP基因与文献报道一致;成功构建了pMSCV/ePNP重组逆转录病毒载体;ePNP基因在MDA-MB435细胞中获得稳定表达。[结论]pMSCV/ePNP自杀基因载体的成功构建及其表达为ePNP应用于肿瘤基因治疗奠定了基础。
【基金】 浙江省自然科学基金资助项目(Y206897);宁波市自然科学基金资助项目(2006A610055)
- 【文献出处】 肿瘤学杂志 ,Journal of Oncology , 编辑部邮箱 ,2009年04期
- 【分类号】R346;R73-36
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