鸡胚精原干细胞转染EGFP获得转基因精子的研究

【摘要】 目的:通过精原干细胞体外转染外源基因获得转基因精子。方法:孵化16d的鸡胚睾丸,酶消化获取精原干细胞(SSCs),纯化后体外培养和传代扩增,碱性磷酸酶(AKP)活性和胚胎阶段特异性抗原(SSEA-1)免疫荧光鉴定。电穿孔介导EGFP转染SSCs,G418筛选8d后将阳性SSCs移植入经白消安处理的实验鸡体内。结果:移植后25d采集实验鸡精液检测,精子密度为3.87(1010/L),表达EGFP的成熟精子比率为4.25%;移植后85d,精子密度为3.27(1011/L),表达EGFP的成熟精子比率为16.25%。睾丸组织冰冻切片显示,曲精细管中转染后的SSCs定居在曲精细管的基底部,有表达EGFP蛋白生精细胞。收集实验鸡精液,提取DNA进行PCR扩增EGFP基因,经凝胶电泳检测,精液DNA的条带清晰,与目的片段大小一致。结论:鸡胚精原干细胞体外转染EGFP可获得转基因精子,为进一步生产转基因模型动物拓宽了途径。更多还原