VCC-1真核表达载体的构建及肝癌细胞SMMC7721稳定转染株的建立及鉴定

【摘要】 目的:构建pcDNA3.1(-)/VCC-1真核表达载体并将其稳定转染到肝癌细胞系SMMC-7721中。方法:以SMMC-7721细胞总RNA为模板,通过RT-PCR扩增VCC-1基因编码区cDNA,并将扩增的cDNA片段与pMD19-T载体连接后亚克隆到真核表达载体pcDNA3.1(-)中。重组子经酶切分析及测序鉴定后,用脂质体转染技术将其导入到人肝癌细胞系SMMC-7721,经G418筛选并建立稳定的转染细胞株,应用RT-PCR及Western blot检测转染前后该细胞株VCC-1基因的表达。结果:pcDNA3.1(-)/VCC-1经酶切鉴定及DNA测序证实序列完全正确,真核表达载体构建成功;经RT-PCR及West-ern blot检测,重组质粒转染株的VCC-1基因的表达水平高于对照组,证实VCC-1基因稳定转染到SMMC-7721细胞中并得到表达。结论:成功地建立了人基因VCC-1的肝癌细胞SMMC-7721稳定转染株,为进一步研究VCC-1的功能奠定了基础。更多还原