节点文献
酿酒酵母钙调蛋白依赖性激酶-2的过量表达及其在氧化胁迫应答中的作用初探
Overexpression of CaM-dependent kinase-2(CMK2)and initiate study on its role in oxidative stress response in Saccharomyces cerevisiae
【摘要】 利用PCR方法扩增钙调蛋白依赖性激酶(CaM-dependent kinase 2)基因的蛋白质编码序列,经限制性内切酶KpnI和BamH I酶切后连接入空载体pYES2/NTA构建真核表达载体,构建的pYES2/NTA-cmk2转化酿酒酵母菌株BY4741进行真核表达.经诱导和收集细胞后,对酵母细胞用玻璃珠震荡破壁,收集上清液进行镍离子亲和层析,并纯化CMK2,纯化的蛋白通过免疫杂交检测.并且初步研究了CMK2在酵母细胞氧化胁迫应答中的作用.
【Abstract】 The ORF of CaM-dependent kinase-2 was amplified by PCR, and cloned into expression vector of pYES2/NTA to construct recombinant expression plasmid pYES2/NTA-cmk2. The recombinant plasmid was transformed into Saccharomyces cerevisiae strain BY4741 and overexpressed. The His6 tagged fusion protein was purified by Ni2+ affinity chromatography and further analyzed by SDS-PAGE and immune blot. Role of CMK2 in oxidative stress response was studied initiatively.
【关键词】 钙调蛋白依赖性激酶；
酿酒酵母；
过量表达；
氧化胁迫应答；
【Key words】 CaM-dependent kinase-2； Saccharomyces cerevisiae； overexpression； oxidative stress response；
【Key words】 CaM-dependent kinase-2； Saccharomyces cerevisiae； overexpression； oxidative stress response；
【基金】 国家自然科学基金(30671181)
- 【文献出处】 四川大学学报(自然科学版) ,Journal of Sichuan University(Natural Science Edition) , 编辑部邮箱 ,2009年05期
- 【分类号】Q78
- 【被引频次】1
- 【下载频次】41