动粒蛋白CENP-K和CENP-H可形成异源超螺旋复合体

【摘要】 动粒(kinetochore)是位于纺锤体主缢痕处表层的特化结构.它通过与纺锤体微管的结合,在有丝分裂期拉动染色体向两极运动,同时具有机械力产生和与中期检验点有关的功能,是细胞中机械强度最高的结构之一.动粒由一个很大的复杂的蛋白网络组成,目前了解较清楚的核心蛋白网络是KMN网络(K,KNL1;M,Mis12复合物;N,NDC80复合物)和CCAN网络(常驻性着丝粒相关网络,constitutive centromere-associated network),但对其蛋白组分之间相互作用的分子机制仍然了解很少.本研究采用串联亲和纯化(TAP)技术在稳定表达TAP-CENP-K的HEK293细胞中寻找CENP-K的稳定蛋白复合体,结果表明CENP-K和CENP-H形成强稳定的(耐受750mmol/L盐浓度)、比例接近11的蛋白复合体.经过预测,CENP-K与CENP-H都是超螺旋(coiled-coil)蛋白.CENP-K与CENP-H片段进行的体外Pull-down实验也证明了两者的N端片段之间以及C端片段之间分别存在直接的相互作用,并且C端片段之间的相互作用更明显.综上所述,CENP-H与CENP-K之间的强相互作用可能是通过形成异源超螺旋复合体实现的,可能在介导动粒与微管连接中起到重要的作用。更多还原