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乙型肝炎病毒聚合酶基因重组腺病毒表达系统的构建和初步鉴定  
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【英文篇名】 Construction and identification of the recombinant adenoviral expressing system with hepatitis B virus reverse polymerase gene
【下载频次】 ★★★
【作者】 李晖; 彭劼; 王战会; 周彬; 余治健; 王程; 侯金林;
【英文作者】 LI Hui; PENG Jie; WANG Zhan-hui; ZHOU Bin; YU Zhi-jian; WANG Cheng; HOU Jin-lin.Department of Infectious Disease; Nan-fang Hospital of Southern Medical University; Guangzhou 510515; China;
【作者单位】 南方医科大学南方医院感染内科;
【文献出处】 广东医学 , Guangdong Medical Journal, 编辑部邮箱 2009年 02期  
期刊荣誉：ASPT来源刊  CJFD收录刊
【中文关键词】 HBV; 聚合酶; 重组腺病毒;
【英文关键词】 HBV; polymerase; recombinant adenovirus;
【摘要】 目的构建乙型肝炎病毒聚合酶基因(RT/RNaseH区段)腺病毒表达系统并初步鉴定其转录表达。方法采用PCR方法从pUC19-1.24HBV质粒中扩增RT/RNaseH区段,将该片段与pCMV-Tag2B载体连接构建腺病毒穿梭载体,将其在Bj5183细菌中重组,获得的重组质粒转染到Ad293细胞中包装,待细胞裂解后收集含病毒的上清并感染Huh7细胞,48h后通过RT-PCR鉴定目的基因转录。结果成功扩增HBVRT区并插入pC-MV-Tag2B载体,成功获得腺病毒重组质粒并在AD293中包装成病毒颗粒,病毒颗粒感染Huh7细胞后RT-PCR可以在Huh7细胞中检测到HBVRT区段mRNA转录。结论成功构建乙型肝炎病毒聚合酶基因RT/RNaseH区段的腺病毒表达系统,该系统能在Huh7细胞中转录,但逆转录蛋白的表达仍待进一步检测。
【英文摘要】 Objective To construct the adenoviral expressing system of hepatitis B virus reverse polymerase gene(RT/RnaseH domain) and identify the transcription of this system in Huh7 cells.Methods HBV/P(RT/RNAaseH) gene fragment was amplified from pUC19-1.24HBV and subsequently inserted into pCMV-Tag2 vector.pCMV-Tag2-RT/RNAaseH vector was recombined after transformed into Bj5183 bacterium.The recombinant plasmids extracted from Bj5183 bacterium was transfected into Ad293 cells and encapsidated into adenovirus partic...
【基金】 国家自然科学基金资助项目(编号:30500434)
【更新日期】 2009-04-07
【分类号】 R346
【正文快照】 乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)感染可引起急性肝炎、慢性肝炎、暴发性肝衰竭、肝硬化及原发性肝癌等一系列肝病变,严重威胁人类健康。我国属HBV感染的高发地区,约有1.3亿慢性HBV感染者,其中有2～3千万是需要抗病毒治疗的活动性肝病患者。乙型肝炎作为世界上最常见的传染

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