人乳头瘤病毒基因分型液态芯片构建中的影响因素

【摘要】 目的基于LuminexTM100技术平台,构建人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)基因分型液态芯片;探讨在构建HPV基因分型液态芯片过程中的影响因素。方法在LuminexTM平台上,采用国际公认的标准HPV质粒构建13种基因分型HPV芯片,选择通用引物、探针,将探针有效的偶联到微球上。优化PCR体系和杂交体系,检测反应中PCR浓度、杂交反应时间、微球的时效等对构建芯片的影响,测定标准质粒变异系数(CV)值。结果采用构建的HPV液态芯片,可准确区分HPV基因型。对349例标准样本检测结果进行回代特别函数判别分析,检测准确率在96.7%以上。对构建芯片条件进行分析,杂交反应时间对杂交反应结果在一定的杂交时间内有明显的影响;当PCR产物不同浓度范围时,PCR产物的浓度对荧光值有不同的影响,各型HPV探针CV范围为0.41%~14.69%。结论杂交反应时间、样品PCR反应中的污染、微球的时效和探针的质量等均可以影响液态芯片系统的构建。构建的HPV基因分型液态芯片检测系统,检测性能稳定,具有可重复性,可应用于临床的大量样品的筛查。更多还原