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检测微囊藻毒素合成酶基因mcyH的SYBR GreenⅠ实时荧光定量RT-PCR方法的建立

Quantification of microcystin synthetase gene mcyH using real-time quantitative RT-PCR with SYBR greenⅠ

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【作者】 方志慧许敏程凯赵以军

【Author】 FANG Zhihui,XU Min,CHENG Kai,ZHAO Yijun(College of Life Science,Huazhong Normal University,Wuhan 430079)

【机构】 华中师范大学生命科学学院

【摘要】 利用RT-PCR方法从铜绿微囊藻PCC7806 mcy基因中扩增出目的基因片段,用TA克隆方法将基因片段插入pGEMT-T Easy中来制备质粒标准品.通过不同连续稀释倍数的质粒标准品成功构建了16srRNA和mcyH两基因的标准曲线,该法构建的两基因标准曲线r2分别为0.9916和0.9938,且质粒标准品具有较好的重复性,满足实时荧光定量RT-PCR的要求.

【Abstract】 Microcystis aeruginosa 7806 mcy genes RT-PCR product was subcloned into PGEM-T vector to contrust recombinant plasmid.Standard curves of 16srRNA and mcyH were developped by different folds serial diluted dplasmid DNA,and r2of two standard curves separately was 0.9916 and 0.9938 by the method,The plasmid standard has a better reproducibility.It can satisfy the experiments need.

【关键词】 mcyH实时荧光定量RT-PCRSYBR GreenⅠ
【Key words】 mcyHReal time RT-PCRSYBR GreenⅠ
【基金】 国家自然科学基金项目(30670088)
  • 【文献出处】 华中师范大学学报(自然科学版) ,Journal of Huazhong Normal University(Natural Sciences) , 编辑部邮箱 ,2008年03期
  • 【分类号】X52
  • 【被引频次】6
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