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杜仲RAPD反应体系的优化
Optimization of RAPD Reaction System in Eucommia ulmoides Oliv.
【摘要】 以杜仲优良品种的幼叶为材料提取总DNA,采用单因素梯度试验筛选法进行了杜仲RAPD反应的优化。确定的优化反应体系为:25μL反应体积中,10×buffer 2.5μL,TaqDNA聚合酶1U,随机引物(5μmol/L)2.0μL,MgCl2(25 mmol/L)2.0μL,dNTP(2.5 mmol/L)2.0μL,模板2 mg/L,补ddH2O至25μL。扩增程序为:94℃预变性5 min,94℃变性30 s,37℃退火30 s,72℃延伸90 s,35个循环,72℃延伸10 min,4℃保持产物。在此条件下得到的RAPD图谱清晰、稳定,为进一步利用该技术开展杜仲有关分子生物学研究提供了技术参考。
【Abstract】 Using the total DNA extracted from the immature leaves of Eucommia ulmoides Oliv.as samples,the RAPD reaction system was optimized.The results showed that the optimum concentrations of each components in 25μL reaction system were as follows:10×buffer 2.5μL,Taq DNA polymerase 1U,MgCl2(25 mmol/L)2.0μL, dNTP(2.5 mmol/L)2.0μL,prime(5μmol/L)2.0μL,template DNA 2 mg/L.The PCR reaction program was:pre-denature at 94℃for 5 min,then 94℃30 s,37°30 s,72℃90 s,35 cycles,and finally extended at 72℃for 10 min,keep the PCR products at 4℃。
- 【文献出处】 西北林学院学报 ,Journal of Northwest Forestry University , 编辑部邮箱 ,2007年04期
- 【分类号】S792.99
- 【被引频次】15
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