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GAP-43干扰RNA表达载体的构建与鉴定

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【机构】上海第二医科大学神经生物学实验室；上海第二医科大学神经生物学实验室上海200025；蚌埠医学院附属医院检验科；安徽蚌埠233003；上海200025；上海200025；美国路易斯威尔大学神经外科系；肯塔基40292；美国；

【摘要】目的:构建GAP-43小干扰RNA(SiRNA)的表达载体并在大鼠嗜铬细胞瘤细胞系PC12中验证其抑制效果。方法:利用设计软件根据GAP-43mRNA序列设计特异性SiRNA插入序列,体外合成该序列后将其定向克隆入真核表达载体pRNAT H1.1/Neo。以LipofectamineTM2000试剂转染GAP-43-SiRNA表达载体至PC12细胞中,以NGF诱导PC12细胞GAP-43的表达,以免疫组化方法鉴定GAP-43-SiRNA对GAP-43表达的抑制效果。结果:DNA测序证实合成的并被克隆入真核表达载体pRNATH1.1/Neo的SiRNA插入序列完全正确,GAP-43-SiRNA表达载体转染PC12细胞后可特异性抑制NGF诱导的PC12细胞的GAP-43的表达。结论:GAP-43-SiRNA表达载体构建成功,为后期研究GAP-43在少突胶质细胞前体上表达的意义奠定了基础。更多还原

【关键词】 GAP-43；小干扰RNA；表达载体； PC12；

【基金】上海市科技发展基金资助(No.00JC14021);国家重点基础研究发展规划(973)项目资助(No.2003CB515302)

【文献出处】细胞与分子免疫学杂志 ,Journal of Cellular and Molecular Immunology , 编辑部邮箱 ,2005年06期

【分类号】Q78;
【被引频次】1
【下载频次】81

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