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PCR快速筛选重组克隆方法的建立

Rapid Screening of Recombinant Clone by PCR

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【作者】 张传生耿立英杨娜娜孟春花朱靖杜立新

【Author】 ZHANG Chuan-sheng1,GENG Li-ying2,YANG Na-na2,MENG Chun-hua2,ZHU Jing2,DU Li-xin3(1.College of Life Science, Shandong Agricultural University,Taian 271018,China;2.College of Animal Science and Technology,Shandong AgriculturalUniversit,Taian 271018,China;3.Animal Husbandry Research Institution of Chinese Agricultural Science College,Beijing 100094,P.R.China)

【机构】 山东农业大学生命科学学院山东农业大学动物科技学院中国农业科学院畜牧研究所 山东泰安271018山东泰安271018北京100094

【摘要】 目的 :建立一种PCR技术快速筛选重组克隆的方法。方法 :用Triton裂解菌落作为模板 ,以pMD - 18T载体多克隆位点设计的引物与目的基因猪 β-INF引物设计不同组合 ,PCR扩增待检重组克隆。 结果 :PCR技术快速筛选出猪 β -INF重组克隆并鉴定了插入方向。结论 :在采用PCR方法直接使用细菌菌落参与反应可以快速筛选重组克隆

【Abstract】 To set up a new method for rapid screening of recombinant clone.By taking the sequences from the plasmid vector and sequences from the inserted gene as the primer pairs,a method has been constructed with 5% Triton X-100 lysis buffer and PCR for scalping and identifying positive recombination plasmids conveniently and fast.The positive clone and orientation of DNA insertion were conveniently determined and the results were in good accordance with those by traditional restriction enzyme methods.This method could screen recombinant clone rapidly,while identifying the orientation and length of the inserted sequence.

【关键词】 重组克隆筛选PCR
【Key words】 recombinant clonescreeningPCR
【基金】 国家自然科学基金项目 (30 2 70 949) ;山东省自然科学基金项目 (编号 :Y97D0 30 62 )资助 ~~
  • 【分类号】Q78
  • 【被引频次】3
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