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脱氧核酶抑制近日基因period1表达的实验研究

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【作者】 周薇； 王跃锜； 刘延友； 彭文珍； 肖静； 朱彬； 王正荣；

【机构】 四川大学华西基础与法医学院生物医学工程研究室； 四川大学华西基础与法医学院生物化学与分子生物学教研室； 四川大学华西基础与法医学院生物医学工程研究室 成都610041； 成都610041； 成都610041；

【摘要】 研究脱氧核酶对近日钟基因period1(per1)表达的影响,进而寻找治疗和近日节律有关疾病的基因疗法.设计合成针对per1的脱氧核酶DRz164,DRz256,并构建pcDNA3-per1164:256体外转录载体,将转录产物和脱氧核酶混合,在一定反应条件下进行体外切割反应,地高辛酶联免疫及酶催化显色法检测脱氧核酶的体外切割效率.将pcDNA3-per1和DRz164或DRz256在脂质体的介导下转染NIH3T3细胞,通过逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、流式细胞术(FCM)检测脱氧核酶对近日基因表达的影响.于37℃孵育2h后,DRz164对底物的剪切百分率为63%,DRz256为50.5%.RT-PCR半定量检测per1mRNA表达水平明显下降,FCM结果显示细胞内Per1蛋白的合成受到抑制.脱氧核酶DRz164,DRz256体外具有定点切割近日钟基因per1mRNA组分的活性,使转染细胞per1mRNA和Per1蛋白表达下降.

【关键词】 Period1基因； 脱氧核酶； 体外切割； 基因转染；
【基金】 国家自然科学基金资助项目(批准号:3007027,39970275)
  • 【文献出处】 中国科学C辑:生命科学 ,Science in China,Ser.C , 编辑部邮箱 ,2005年02期
  • 【分类号】Q786
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