荧光差异显示PCR克隆大鼠脑缺血相关基因KIAA0280-中国学术期刊网络出版总库

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荧光差异显示PCR克隆大鼠脑缺血相关基因KIAA0280

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【英文篇名】	Identification of Rat Ischemia Related Gene KIAA0280 by Fluorescence Differential Display PCR
【下载频次】	★★★★
【作者】	臧林泉; 银巍; 皮荣标; 邱鹏新; 苏兴文; 颜光美;
【英文作者】	ZANG Lin quan; YIN Wei; PI Rong biao; QIU Peng xin; SU Xing wen; YAN Guang mei (Department of Pharmacology; Preclinical Medical School; SUN Yat sen University; Guangzhou 510080; China);
【作者单位】	中山大学基础医学院药理教研室; 中山大学基础医学院药理教研室广东广州; 广东广州;
【文献出处】	中山大学学报(医学科学版) , Journal of Sun Yat-sen University (Medical Sciences), 编辑部邮箱 2004年 02期期刊荣誉：中文核心期刊要目总览 ASPT来源刊 CJFD收录刊
【中文关键词】	差异显示PCR; 大鼠; 脑缺血; 基因;
【英文关键词】	differential display PCR; rat; cerebral ischemia; gene;
【摘要】	【目的】研究大鼠急性局灶性脑缺血时缺血组织与非缺血组织中基因表达的差异,克隆出与脑缺血相关的基因。【方法】应用荧光差异显示PCR(FDDPCR)从同一例大鼠大脑皮层缺血组织和非缺血组织中筛选出有表达差异的基因片段,经反向Northernblot杂交,将杂交阳性的片段且经RT-PCR反复验证,选取差异明显的片段进行克隆测序;经生物信息学分析处理,选取同源性低的EST片段R6,利用cDNA5'端快速扩增PCR(5'RACE法)进行基因全长的克隆。【结果】利用5'RACE法成功地克隆EST片段R6至编码区,扩增并获取全长4821bp及完整的可读框(ORF),RT-PCR及Northernblot印迹结果证实了克隆的结果,同源性分析发现该基因ORF与人大脑中已知的KIAA0280基因高度同源,同源性96%,编码166个氨基酸,为结构及功能未明确蛋白质,该基因定位于大鼠第11号染色体长臂(11q.13)。【结论】应用荧光差异显示PCR成功地自大鼠体内克隆到与人KIAA0280相似的基因,其在大鼠急性局灶性脑缺血中明显上调,该蛋白质结构及功能均未见报道及研究,其显著地差异表达提示其在脑缺血病理过程中具有重要作用。
【英文摘要】	To study the differences in gene between acute focal ischemia and non ischemia tissues in rat so as to clone the related gene of brain ischemia. The fluorescence differential display was applied to screen the differential expression gene between focal brain ischemia and non ischemia region. After identification by reverse Northern blot and RT PCR, the full length of the target EST R6 that was not highly homologous with the known gene was cloned by 5′RACE. R6 in 4 821 bp full length was successfully cloned ...
【基金】	国家杰出青年基金资助项目(39625022); 美国中华医学会CMB基金资助项目(98-677); 国家自然科学基金资助项目(39900181); 广东省重点科研基金资助项目(ZKM028091)
【更新日期】	2005-08-19
【分类号】	R741
【正文快照】	差异显示技术广泛应用于多种组织中mRNA的差异表达犤1犦。该方法具有高效、安全、快速、灵敏、可靠等优点。我们使用此种方法用来筛选与急性局灶性脑缺血过程中相关差异表达的基因。中风与其他原因引起的急性局灶性脑缺血是目前威胁人类生命健康的重大疾病之一。各种病因引起的

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