HCV非结构蛋白3真核表达载体pcDNA3.1(-)/NS3的构建

【摘要】 目的 :构建HCVNS3基因真核表达载体 ,为进一步研究和解析HCVNS3基因诱发不死化人肝细胞癌化的机制准备了条件。方法 :将含HCV全长基因的pBRTM/HCV1- 30 11质粒转化感受态菌JM10 9并扩增 ;提取pBRTM/HCV1- 30 11质粒 ;从pBRTM/HCV1- 30 11质粒中PCR扩增出HCVNS3片段 ;并将其插入到克隆载体pMD18-T中 ,再与表达载体pcDNA3 1(- )重组 ,以得到重组的真核表达载体pcDNA3 1(- ) /NS3;最后限制性酶切鉴定HCVNS3表达载体。结果 :从pBRTM/HCV1- 30 11质粒中扩增出的HCVNS3片段大小正确 ,经测序证明其碱基序列为编码目的基因的正确序列 ;凝胶电泳结果证明已将此片段克隆到pcDNA3 1/NS3内。结论 :成功地构建了HCVNS3基因的真核表达载体pcDNA3 1(- ) /NS3更多还原