【摘要】 目的 :利用基因打靶技术构建基因打靶载体和基因缺失株 ,用于结核分枝杆菌基因Rv0 90 1功能的研究。方法 :结核分枝杆菌标准株H37Rv体外培养 ,对其Rv0 90 1基因及两侧序列进行体外扩增 ,连接载体及目的片段 ,切除目的基因 ,再引入筛选标志构建重组自杀质粒 ,分别用酶切及PCR鉴定 ;用电穿孔法将重组自杀质粒转入结核杆菌H37Rv株 ,用PCR鉴定。结果 :经鉴定PCR产物及插入片段大小与预期值相符 ,且为所需目的基因片段 ,成功切除靶片段 ;蓝白斑筛选证实标记基因插入片段插入方向正确 ;Rv0 90 1基因缺失株用PCR鉴定成功缺失了目的基因片段 2 5kb。结论 :成功构建了用于结核分枝杆菌基因打靶的置换型载体和Rv0 90 1新基因缺失株 ,为Rv0 90 1基因功能的研究奠定了基础更多还原