人Angiopoietin-2剪接体Ang₂₄₄₃的快速克隆及高效表达

【摘要】 目的 构建Angiopoietin-2剪接体Ang₂₄₄₃全长及功能结构域（CC区和FL区）的原核和真核表达质粒,并在大肠杆菌内获得高产量表达。方法 利用RT-PCR方法从人脐静脉内皮细胞中扩增获得Ang₂₄₄₃功能结构域CC区和FL区,以剪接扩增PCR克隆全长片段,亚克隆至pET-32b（-）载体,IPTG诱导获得融合蛋白表达。凝血酶酶切后经柱层析纯化获得完全蛋白。结果 在所培养的人脐静脉内皮细胞中,Ang₂₄₄₃是唯一表达的剪接体。以此构建了pET-CC、pET-FL和pET-Ang2三个原核和真核表达载体,并在大肠杆菌内获得高产量表达。1mM IPTG诱导表达后蛋白产量60％。凝血酶酶切完全,经柱层析纯化后获得完全蛋白。结论 成功克隆并表达了在所培养的人脐静脉内皮细胞中唯一表达的Angiopoietin-2剪接体Ang₂₄₄₃全长及功能结构域蛋白。更多还原