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一种简便的染色质免疫沉淀法的建立

A Simple Chromatin Immunoprecipitation Assay Protocol

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【作者】 傅湘辉刘德培辛立郝德龙董文吉黄粤梁植权

【Author】 FU Xiang-Hui, LIU De-Pei **, XIN Li, HAO De-Long, DONG Wen-Ji, HUANG Yue, LIANG Chih-Chuan (National Laboratory of Medical Molecular Biology, Institute of Basic Medical Sciences, Chinese Academy of Medical Sciences and Peking Union Medical College, Beijing 100005, China)

【机构】 中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室医学分子生物学国家重点实验室 北京100005北京100005北京100005

【摘要】 染色质结构和基因表达调节是当前国际前沿研究的热点 .染色质免疫沉淀法是研究染色质结构的首选方法 ,它不仅可用来研究体内反式因子与DNA的相互作用 ,也可以用来研究组蛋白修饰与基因表达的关系 .综合国外相关文献 ,建立了一种简便的染色质免疫沉淀法 ,并通过对诱导前后的MEL细胞中 β 珠蛋白基因簇组蛋白H3乙酰化的研究 ,证实了其可操作性 .结果表明 :高敏位点HS2和活跃基因 βmaj的启动子区域存在较高的组蛋白乙酰化水平 ,且诱导前后变化显著 ,而不活跃基因Ey的启动子区域则几乎检测不到组蛋白的乙酰化 ,且诱导前后无明显变化 .这一结果与以前的报道相吻合

【Abstract】 Chromatin structure plays a critical role in eukaryotic gene expression. Chromatin immunoprecipitation assay (ChIP) provides a powerful tool to analyze the interaction of trans-acting factors with specific chromatin regions in vivo, as well as the role of histone modifications in gene regulation. A simple ChIP protocol is established and used to study the H3 acetylation pattern of the β-globin locus in MEL cells. DMSO induction results in a dramatic increase in H3 acetylation at hypersensitive site HS2 and active gene (βmaj) promoter, whereas the inactive gene (Ey) promoter maintains low acetylation. This result indicates that the ChIP method is feasible.

【基金】 国家自然科学基金资助项目 (3 0 2 0 0 15 8)~~
  • 【文献出处】 生物化学与生物物理进展 ,Progress In Biochemistry and Biophysics , 编辑部邮箱 ,2003年04期
  • 【分类号】Q78
  • 【被引频次】7
  • 【下载频次】739
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