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乙型肝炎病毒表面抗原preS2+S基因在Pichia Pastoris酵母系统的分泌表达  
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【英文篇名】 Secreted Expression of Hepatitis B Virus PreS2+S Gene in Pichia Pasto ris Expression System
【下载频次】 ★★★☆
【作者】 徐丽宏; 梁国栋; 付士红; 宋宏; 王大维; 苏乃伦; 夏国良; 张智清;
【英文作者】 XU Li-hong; LIANG Guo-dong; FU Shi-h ong; SONG Hong; WANG Da-wei; SU Nai-l un; XIA Guo-liang; ZHANG Zhi-qing;
【作者单位】 中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所病毒基因工程国家重点实验室; 中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所病毒基因工程国家重点实验室 北京 100052; 北京 100052;
【文献出处】 病毒学报 , Chinese Journal of Virology, 编辑部邮箱 2003年 03期  
期刊荣誉:中文核心期刊要目总览  ASPT来源刊  CJFD收录刊
【中文关键词】 乙型肝炎病毒表面抗原preS2 S基因; adw2亚型; PichiaPastoris酵母表达系统; 分泌型表达;
【英文关键词】 HBsAg preS2 S gene; adw 2 subtype; Pichia Pastoris expre ssion system; secreted expression;
【摘要】 拟获得adw2亚型乙型肝炎(乙肝)病毒表面抗原preS2+S基因在PichiaPastoris酵母分泌型表达系统(pPIC9K)的高效表达。实验首先将adw2亚型乙肝病毒表面抗原preS2+S基因重组到分泌型酵母表达载体(pPIC9K)形成表达质粒,电转化酵母细胞KM71,G418筛选多拷贝整合克隆,经甲醇诱导表达并用SDS-PAGE电泳及酶免疫法检测表达产物。经100个克隆筛选获得了表达量较高的表达菌株WC4。该菌株甲醇诱导后细胞上清10倍浓缩SDS-PAGE电泳检测显示,细胞上清中有特异蛋白条带,且第6天表达量最高,表达产物单体分子量为31kD左右。用美国雅培公司AUZYMEMONOCLONAL试剂盒估算表达量为2μg/100OD600细胞。上述结果表明,乙肝病毒表面抗原preS2+S基因在本系统中获得了分泌表达。同时检测了酵母细胞裂解液中特异蛋白质的表达,结果发现,自甲醇诱导后第一天即可检测到表达产物,而且除了第6天细胞外表达量高于细胞内外,其余各天的表达水平均表现为细胞内高于细胞外。以上结果提示,利用分泌型酵母表达系统表达乙肝病毒表面抗原在技术上可行,但表达产量偏低,一些蛋白滞留在细胞内未能分泌到培养...
【英文摘要】 In order to obtain high-l evel secreted expression of hepati tis B virus(HBV) preS2+S gene in P ichia Pastoris system,the HBV surf ace antigen(HBsAg) preS2+S gene wa s cloned into the secreted express ion vector pPIC9K at first.The rec ombinant plasmid p9Kadw2S was then electroporoted into yeast Pichia P astoris cells KM71.Multiinsertion transformants were screened with G 418 resistance.After methanol indu ction,the expressed HBsAg protein were analyzed by SDS-PAGE and ELIS A.The high-level expression cl...
【基金】 国家十五科技攻关项目(编号:2001BA705B05)
【分类号】 R346
【正文快照】   PichiaPastoris高效酵母表达系统兼具有原核表达产量高和真核表达能糖基化、构型正确的优点,而且和第一代酵母表达系统———啤酒酵母表达系统(Saccharomycescerevisiae)相比,外源蛋白表达量提高10~100倍[1]。这些特征使该系统已成为一个非常有吸引力的表达系统。用Pichia

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