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α-天冬氨酰二肽酶基因的高表达和产物回收

High Expression of αaspartyl Dipeptidase Gene and Recovery of Its Products

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【作者】 张红缨杨巍王晓萍张今

【Author】 Zhang Hongying Yang Wei Wang Xiaoping Zhang Jin (The State Key Lab of Enzyme Engineering,Jilin University,Changchun 130023)

【机构】 吉林大学酶工程国家重点实验室

【摘要】 构建了α天冬氨酰二肽酶基因(pepE)与载体pBV220连接的高表达重组质粒(pBVPEP,4337bp)。转化大肠杆菌后,目的基因表达为两种形式的产物,即细胞质中可溶性蛋白(~75%)和包含体蛋白,共占细菌总蛋白的30%左右。SDSPAGE分析温敏诱导的表达蛋白,可以观察到约27kDa的高表达蛋白条带,与提纯的酶带一致。用不同于以往的萃取包含体蛋白的方法,回收了包含体中95%以上的表达蛋白。

【Abstract】 A high expressed recombinant plasmid,consisted of the plasmid pBV220 and the gene of αaspartyl dipeptidase from S.typhimurim TN2401,was constructed and named pBVPEP.After transformed into E.coli DH5 α,the expressed target protein,amounting to 30% of the total cellular proteins,occurred as soluble protein in cytoplasm (about 75%) and also as insoluble inclusion bodies(about 25%).The insoluble protein was recorvered to 95% by mild treatments.The purified protein exhibited a band of 27kDa on SDSPAGE analysis.

【基金】 国家科委科技专项项目
  • 【文献出处】 生物工程学报 ,CHINESE JOURNAL OF BIOTECHNOLOGY , 编辑部邮箱 ,1998年02期
  • 【分类号】Q789,
  • 【被引频次】4
  • 【下载频次】61
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