溶血性巴氏杆菌白细胞毒素诱导靶细胞死亡的分子和生物化学机理

【摘要】 溶血性巴氏杆菌白细胞毒素（LKT）是能杀死牛免疫细胞的穿孔毒素族（RTX）中的一种物质。有些研究提示这类毒素可诱使靶细胞凋亡。本课题是以LKT处理BL3细胞。再用可评价凋亡细胞各种状况的分子生物学技术和流式细胞仪评价BL3细胞，从形态、光散射谱型和对Hoechst33258的选择性着色等方面证明，中毒细胞与正在凋亡的细胞相一致。经末端脱氧核苷酸转移酶（Tdt）介导的dUTP－FITC缺口末端标记法（TUNEL）分析基因组DNA，表明当多聚ADP－Ribose多聚酶（PARP）裂解时，见有核小体间DNA断裂，还见有DNA修复酶失活的迹象。经LKT处理过的细胞与annexin－V－FITC结合，显示磷脂酰丝氨酸基团从胞膜内移位于膜外。LKT对细胞的作用与其剂量相关。经与抗LKT单克隆抗体共温后，其作用被抑制．细胞经抗β2整合素抗体预温处理可抑制LKT诱发细胞凋亡。导向结合试验表明，靶细胞的去污剂溶解物能抑制LKT与β2整合素异二聚体的结合。本文结果显示，LKT在相对低剂量时可诱致靶细胞发生凋亡。而且，作者还首次发现，LKT与β2整合素结合是诱发细胞凋亡的启动步骤。本文为了解牛巴氏杆菌病的发病机理提供新的见解，有益于该病防治策略的制订。更多还原