人肿瘤坏死因子Gln 102～Glu 107缺失型的构建及其活性的研究

【摘要】 基于对有关肿瘤坏死因子结构和功能关系研究资料的分析,设计了一种缺失了Gln 102～Glu 107位共6个氨基酸的新型肿瘤坏死因子。首先,利用PCR技术分析扩增出Vall～Cys 101和Gly 108～Leu 157基因片段,连接后再克隆到表达载体pJLA503中,转化大肠杆菌,发酵时进行42℃诱导表达,得到了新型肿瘤坏死因子CG-hTNF的产物。经过对pCG-hTNF中克隆的基因进行DNA测序鉴定,证明其顺序完全正确。发酵获得的CG—hTNF的表达量约占总蛋白量的15％,经测定其体外细胞毒活性,计算得出的比活性比原型RL-hTNF仅提高了10倍以上,说明肿瘤坏死因子中Gln 102与Glu 107区域对TNF与其受体的结合没有多大影响。对CG—hTNF在小鼠体内的半数致死剂量(LD₅₀)进行测定,以mg/kg体重表示CG-hTNF与原型肿瘤坏死因子的毒性基本一致。更多还原