hGM-CSF基因克隆、病毒包转及转染人胃癌、肝癌细胞的研究

【摘要】 <正>hGM-CSF是一种细胞因子,具有对单核巨噬细胞趋化作用及提高它们对肿瘤的吞噬功能,并且能增加粒细胞粘附分子的表达,ADCC杀瘤作用。为了研究hGM-CSF修饰的肝癌细胞,胃癌细胞的方法,我们从人外周血淋巴细胞通过RT-PCR克隆了hGM-CSF基因,鉴定大小后,克隆入pBIuscript和LXSN中,pBIu-script-hGM-CSF进行测序,该基因测序结果:DNA顺序完全正确。纯化LXSN-hGM-CSF质粒,纯化后质粒通过磷酸钙沉淀方法转染PA317包装细胞,经G418(0.5mg/ml)筛选十天,挑选单个克隆,分别扩增培养,细胞数达到1×10~6时测定滴度,我们共筛选十株单克隆,表达量最高为1.5×10~4CFU/ml,其次为1.0×10~4CFU/ml,用病毒上清感染人肝癌细胞株(HHCL)和人低分化胃腺癌细胞株(MKN45)经G418筛选9天后采用MTT法测定生物活性,HHCL-hGM-CSF活性为271.21U/10~6/24小时252.71U/10~6/24小时(20天后),194.28U/10~6/24小时(30天后),98.81U/10~6/24小时(40天后),HHCL活性为4.5U/10~6/24小更多还原