人TNFα基因转染的人肝癌细胞稳定高表达细胞克隆SMMC7721-TNF的建立及其部分生物学特性的初步观察

【摘要】 <正>用重组逆转录病毒载体L-tnfSN的包装病毒颗粒感染人肝癌细胞SMMC7721,G418筛选后,随机挑选10个细胞克隆,扩大培养,检测细胞培养液上清中TNFα的水平,将其中表达TNF最高细胞克隆命名为SMMC7721-TNF。观察SMMC7721-TNF的分子生物学特性。Southern Blot证明TNFα基因完整地整合在细胞基因组中。Northern Blot提示SMMC7721-TNF细胞中有高丰度的TNFα mRNA。流式细胞分离仪测试SMMC7721-TNFα细胞表面MHC抗原的表达情况,发现MHCⅠ类抗原的表达明显增加,MHCⅡ类抗原无明显变化。体外半固体琼脂培养实验提示SMMC7721-TNF在裸鼠中的致瘤性降低,观察培养的SMMC7721-TNF细胞的培养液上清中TNFα生物学活性,发现SMMC7721-TNF表达TNFα的能力随细胞培养时间的延长而有变化,转染后10-40天最高(达389-421u/10~6/24h),50天后细胞分泌TNFα的能力逐渐丧失,同时部分细胞表现出凋亡细胞的形态(HE染色)。更多还原