重组人肿瘤坏死因子β(HuTNFβ)的纯化及抗肿瘤效应的初步研究

【摘要】 <正>本文利用能表达HuTNFβ的工程菌株（P20KLT）按常规培养及扩增,即采用LB培养液（内含Amp100-μg /ml,Tet 5μg/ml）,1∶40扩增,当A550达0.1时,加入IAA（20μg/ml）,当A550为1.0时,中止培养,离心（5000rpm,4℃）收集菌体。在菌体中按1∶5加入缓冲液,冰浴中超声破碎,13,000rpm高速离心20分钟,上清液即为HuTNFβ的粗制品。在此上清液中,在冰浴条件下逐滴加入饱和硫酸铵至终浓度为40％饱和度,磁拌20分钟,静止10分钟,18,000rpm30分钟离心收集沉淀。将经过透析后的沉淀蛋白质通过Sepharose CL-6B柱层析。用紫外监测仪自动绘制波长为280nm的扫描图,图谱显示三个峰。收集吸收峰部分的洗脱液,经0.02MPB透折,测定蛋白含量并检测其抗肿瘤活性。按Rubin方法常规测定HuTNFβ的活性,结果显示,粗制品、经40％（NH₄）₂SO₄沉淀,过Sepharose CL-6B柱层析的样品比活性依次为7.43×10⁴U/mg蛋白;7.20×10⁵U/mg蛋白;7.31×10⁶U/mg蛋白,达到较好的纯化效果。更多还原