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构建单纯疱疹病毒基因组BamH I C片段上有插入突变的重组病毒
CONSTRUCTION OF A RECOMBINANT VIRUS BY INSERTIONAL MUTAGENESIS IN BamH I C FRAGMENT OF HSV-1 DNA
【摘要】 <正> 单纯疱疹病毒(GSV)是重要的人类DNA病毒。国内外学者正在对其基因结构、功能和基因调控机制进行探索,以及利用其作为病毒载体表达外源基因研制基因工程疫苗等,并且已经取得了一定的成绩。多年来,尽管对HSV-1的分子遗传学做了包括序列分析在内的大量研究,但对HSV基因组许多部位的功能,它们相互之间的关系,特别是某特定部位对活病毒生物特性的作用(病毒生长、繁殖、毒力等),所知很少。为了深入了解HSV-1基因组中Bam H I C片段这一未知部分的功能,我们对它进行了克隆、次级克隆和酶谱分析,并且利用胸腺嘧啶核苷激酶基因—小Mu噬菌体系统(TK-mM)组建了在HSV-1的Eam H I C片段上有TK-mM插入的重组质粒。本文报道利用组建的重组质粒DNA和提纯的TK-HSV-1毒株DNA共同转染细胞,获得了在HSV-1基因组Burn H I C片段上有插入突变的重组病毒。
【Abstract】 The recombinant plasmid pRC 1326 DNA carrying the BamH I C fragment of HSV-1 DNA and TK-mM was transfected into 143 TK- cells together with purified virus DNA of a HSV-1 TK- strain. A new recombinant virus with TK+ phonotype was selected. The results of the restriction en-donuclease analysis and nucleic acid hybridization showed that the TK-mM was inserted into the BamH IC fragment of HSV-1 DNA. A recombinant HSV-1 mutated by insertional mutagenesis was obtained.
- 【文献出处】 病毒学报 ,Chinese Journal of Virology , 编辑部邮箱 ,1991年01期
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