酶学方法和电泳方法相结合测定溶菌酶活性的新方法

【摘要】 <正> 测定体液中溶菌酶含量的常用方法为琼脂平板打孔法,其灵敏度低,最适测定范围为10～1000μg/ml。用此方法研究血清溶菌酶含量的细微变化是有困难的。我们设计了一种可称之为火箭电泳的新方法以测定溶菌酶含量。该法将酶学方法和电泳方法结合在一起。将底物溶壁微球菌混合在琼脂糖凝胶中。溶菌酶是一种碱性蛋白质,等电点为 pH10.5～11.0,而底物为细菌壁的酸性多糖,在介于两者等电点之间的 pH 条件下,如 pH6.4,前者带有正电荷,后者带有负电荷,两者因静电吸引而紧密相结合。结合后的溶菌酶在凝胶中不能移动,一旦底物被水解,溶菌酶又恢复游离状态,而向负极移动。电泳过程为酶与底物结合、水解、泳动、再结合。上述过程反复进行至电泳停止及酶失活力止。更多还原