啤酒酵母原生质体电誘导融合和融合子分析

【摘要】 本文报道如下內容; 1.用200ug/ml亚硝基胍诱变处理对数生长期的啤酒酵母SSC₁₀,得到各种营养缺陷型突变体29株。其中4株为双缺突变体,1株为三缺突变体。 2.以营养缺陷型单突变体R_10-9为出发菌株,用自然突变的方法,选出呼吸缺陷型突变体（rho^-）2株。 3.以携带遗传标记的啤酒酵母营养缺陷型R_10-5（put^-）、R_10-6-M（try^-his^-cys^-）、R_10-6-0（try_-Ieu^-）和呼吸缺陷型突变体R_10-9-1(ade^-rho^-以及R_10-9-3（ade^-rho^-）为亲本,在自制融合小室的非均匀交变电场（250-IKV/cm′2MHz）中,使原生质体通过电介质电泳排成不同长度的珠串,建立起质膜间紧密接触,随后在2—3个强度为10—12KV/cm,时程7—12us的直流脉冲作用下,使原生质膜可逆电击穿,导致原生质体融合。 4.电诱导融合的原生质体28℃培养8-14天、在再生平皿上,可以1×10^-5-4.5×10^-4的频率得到融合子,共获56株融合子。连续传代13次后,得到3株遗传性稳定的融合子,对稳定传代融合子进行的遗传和生理特性研究表明原养型融合子是二倍体,其细胞直径比野生型单倍体细胞大;生长速率、发酵利用麦芽糖速率以及产生CO₂的能力,都较双亲株快;在四种产孢子培养基上融合子都不形成子囊孢子,而野生型酵母和营养缺陷型突变体的回复子在其中二种?更多还原