庆大霉素耐药基因的分子克隆及DNA探针制备的研究(简报)

【摘要】 <正> 作者首次从流行的致病性大肠杆菌(EPEC)中的多重耐药菌株E2出发,经药敏测定,R质粒的接合传递,质粒DNA的消除试验及质粒DNA的电泳检测,确证庆大霉素耐药基因在可传递性质粒pEFM2上。质粒pEFM2经限制性内切酶切割成15个片段,以pBR322为截体,利用“鸟枪法”随机克隆,获得了1000株重组子的克隆库。从中筛选出1株仅表达庆大霉素(Gm)和四环素(Tc)抗性的重组子85/HB101。它的重组质粒pBY101经数种限制性内内切酶单切、双切,绘制了物理图谱。继而利用EcoRI酶切pBY101,再经连接亚克隆获得更多还原