白三烯合成抑制剂及受体拮抗剂的药理研究

【作者】 侯艳宁；

【导师】 张均田； 朱秀媛；

【作者基本信息】 中国协和医科大学 ， 生化药理学， 1994， 博士

【摘要】 白三烯（Leukotriens，LTs）是花生四烯酸经5-脂氧酶代谢而生成的一组具有广泛生物学活性的脂类介质。大量的研究资料表明，LTs在多种疾病的病理过程中起着重要作用，因此研制有效的LTs合成抑制剂及受体拮抗剂用于防治与LTs有关的疾病已成为目前研究的热点课题之一。 本研究从建立可行的LTs分离测定方法入手，首先建立了可同时分离测定多种LTs（包括LTB₄、LTC₄及LTD₄）的反相高效液相色谱法，同时选用大鼠腹腔白细胞为实验材料建立了体外LTs生物合成系统。在此基础上，观察了大量天然及合成药物对LTs生物合成的影响，从中发现黄芩甙、秦皮素乙、GL-2（中药买麻藤提取物）以及棉酚对LTs的生物合成具有明显的抑制作用，并以黄芩甙为LTs合成抑制剂的代表药物，进一步研究了其对大鼠白细胞功能的影响。结果表明，黄芩甙可显著抑制人（?）三肽（fMLP）刺激的细胞钙内流，同时还可使白细胞内cAMP水平显著升高，这提示该化合物对LTs生物合成的抑制作用有可能通过细胞内的信号转导系统介导。 有关LTs受体拮抗剂的研制国外十分活跃，但目前仍无理想的药物正式投入临床应用。国内有关这方面的研究尚未见报道。本文采用豚鼠肺组织为实验材料建立了³H-LTC₄及³H-LTD₄放射受体结合法并观察了两种受体的有关特征，结果表明，³H-LTC₄及³H-LTD₄与豚鼠肺膜受体的结合呈单一位点，在30℃条件下，³H-LTC₄的Kd及Bmax值分别为27.0×10^-11mol／l和355.1 fmol／mg蛋白；³H-LTD₄的Kd及Bmax值分别为19.9×10^-11mol／l及232.9 fmol／mg蛋白。我们还从80多个天然及合成的化合物中发现了三个有机硒类化合物（Se9001，Se9005，Se9006）以及一个从中药买麻藤植物中提取的单体GL-3对LTC₄及LTD₄受体具有较高的亲和力，和已知含肽白三烯（SP-LTs）受体拮抗剂FPL₅₅₇₁₂比较，三个有机硒类化更多还原

【Abstract】 This study began with an effort of developing an improved reverse-phase high-performance liquid chromatography （RP-HPLC） procedure to separate and quantitate several leukotrienes （LTs） simultaneously. The production of LTs by rat peritoneal leukocytes following stimulation with A₂₃₁₈₇ and AA. Among several decades of natural and synthetic compounds, Baicalin （BCL）, Esculetin, GL-2 and Gossypol were found to inhibit the biosynthesis of LTs. Further studies were performed to investigate the effect of BCL on the postmembrane signal transduction pathways in the rat PMNLs. The results showed that BCL inhibited the increased intracellular Ca²⁺ induced by fMLP and increased the cAMP level in these cells. These results suggest that the inhibitory effect of BCL on LTs biosynthesis might be mediated by a decrease in Ca²⁺ influx and an increase in cAMP level.Using guinea pig lung membrane as experimental material, and ³H-LTC₄ and ³H-LTD₄ as radio ligands, we here studied the characteristics of LTC₄ and LTD₄ receptors. It was found that the binding of ³H-LTC₄ and ³H-LTD₄ was specific, saturable and reversable. The Ki and Bmax values were 27.0×10^-11 mol/L and 355.1 fmol/mg protein for ³H-LTC₄; 19. 9×10^-11mol/L and 232.9 fmol/mg protein for ³H-LTD₄ respectively at 30℃. We have screened more than 80 natural and synthetic compounds and found that there were three seleno-organic compounds （Se9001, Se9005 and Se9006） and one new compound GL-3 （extracted from Gnetum parvifolium）, which inhibit ³H-LTC₄ and ³H-LTD₄ binding更多还原